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酶標儀基本知識及其檢測原理 |
酶(mei)標儀有單波(bo)(bo)長和(he)雙(shuang)波(bo)(bo)長檢測(ce)功能(neng)有時使用者(zhe)不知在什么(me)情(qing)況下(xia)使用單或雙(shuang)波(bo)(bo)長檢測(ce)。所(suo)謂的(de)(de)“單波(bo)(bo)長"就(jiu)是(shi)使用一(yi)種對(dui)顯色(se)(se)具(ju)最(zui)大(da)吸(xi)收的(de)(de)波(bo)(bo)長即(ji)450 nm或492 nm進行比(bi)(bi)色(se)(se)測(ce)定(ding);而(er)“雙(shuang)波(bo)(bo)長"則(ze)除了用對(dui)顯色(se)(se)具(ju)最(zui)大(da)吸(xi)收的(de)(de)波(bo)(bo)長即(ji)450 nm或492 nm進行比(bi)(bi)色(se)(se)測(ce)定(ding)外,同時用對(dui)特異(yi)顯色(se)(se)不敏(min)感的(de)(de)波(bo)(bo)長如(ru)630 nm進行測(ce)定(ding),酶(mei)標儀最(zui)后打(da)印出來的(de)(de)吸(xi)光度則(ze)為(wei)二者(zhe)之差。630 nm波(bo)(bo)長下(xia)得到的(de)(de)吸(xi)光度是(shi)非特異(yi)的(de)(de),來自于板(ban)子上諸如(ru)指(zhi)紋、灰塵、臟物(wu)等所(suo)致的(de)(de)吸(xi)收。因此,在ELISA比(bi)(bi)色(se)(se)測(ce)定(ding)中,最(zui)好使用雙(shuang)波(bo)(bo)長,且(qie)不必(bi)設空白孔。 二、測定的吸光度范圍 通(tong)常,酶標(biao)儀(yi)的(de)(de)(de)吸(xi)(xi)光度(du)(du)測(ce)定(ding)(ding)(ding)范(fan)(fan)(fan)(fan)圍(wei)(wei)(wei)(wei)在(zai)。0-2.5之(zhi)間即可(ke)以滿(man)足ELISA的(de)(de)(de)測(ce)定(ding)(ding)(ding)要求(qiu)。早期的(de)(de)(de)酶標(biao)儀(yi)可(ke)測(ce)定(ding)(ding)(ding)的(de)(de)(de)吸(xi)(xi)光度(du)(du)一般(ban)在(zai)0-2.5之(zhi)間,但現在(zai)基本上都做了(le)拓(tuo)寬,可(ke)達(da)到3.5以上,并且能保持(chi)很好的(de)(de)(de)精密(mi)度(du)(du)與線(xian)性。如Labsystems公(gong)司Dragon Wellscan MK-2的(de)(de)(de)吸(xi)(xi)光度(du)(du)測(ce)定(ding)(ding)(ding)范(fan)(fan)(fan)(fan)圍(wei)(wei)(wei)(wei)為0-3.5,而Multiskan Ascent的(de)(de)(de)吸(xi)(xi)光度(du)(du)測(ce)定(ding)(ding)(ding)范(fan)(fan)(fan)(fan)圍(wei)(wei)(wei)(wei)(Abs)達(da)0-4.0,在(zai)0-4.0范(fan)(fan)(fan)(fan)圍(wei)(wei)(wei)(wei),線(xian)性誤(wu)差不(bu)超過±2.0%,在(zai)0.3-3.0吸(xi)(xi)光度(du)(du)范(fan)(fan)(fan)(fan)圍(wei)(wei)(wei)(wei)內(nei),測(ce)定(ding)(ding)(ding)精密(mi)度(du)(du)CV小于(yu)±0.2%;3.0-4.0 Abs范(fan)(fan)(fan)(fan)圍(wei)(wei)(wei)(wei)內(nei),測(ce)定(ding)(ding)(ding)精密(mi)度(du)(du)CV小于(yu)士(shi)0.2%。因此(ci),對于(yu)酶標(biao)儀(yi)的(de)(de)(de)吸(xi)(xi)光度(du)(du)范(fan)(fan)(fan)(fan)圍(wei)(wei)(wei)(wei)不(bu)必去刻(ke)意追求(qiu)大(da)的(de)(de)(de)吸(xi)(xi)光度(du)(du)范(fan)(fan)(fan)(fan)圍(wei)(wei)(wei)(wei),主(zhu)要要看在(zai)一定(ding)(ding)(ding)的(de)(de)(de)吸(xi)(xi)光度(du)(du)范(fan)(fan)(fan)(fan)圍(wei)(wei)(wei)(wei)內(nei)的(de)(de)(de)線(xian)性和精密(mi)度(du)(du)如何。 三、光學系統 酶(mei)標儀的(de)(de)光(guang)(guang)學(xue)系(xi)統(tong)采用的(de)(de)是垂直光(guang)(guang)路多通(tong)(tong)道(dao)(dao)(通(tong)(tong)常為8或12通(tong)(tong)道(dao)(dao),亦(yi)有單通(tong)(tong)道(dao)(dao))檢測(ce)(ce)(ce),一般為硅光(guang)(guang)管或光(guang)(guang)導纖維,除測(ce)(ce)(ce)定(ding)通(tong)(tong)道(dao)(dao)外,有的(de)(de)酶(mei)標儀還有一個參比通(tong)(tong)道(dao)(dao),每次測(ce)(ce)(ce)定(ding)可(ke)進行自我校準(zhun)。酶(mei)標儀的(de)(de)光(guang)(guang)學(xue)系(xi)統(tong)功(gong)能如何,均可(ke)通(tong)(tong)過酶(mei)標儀測(ce)(ce)(ce)定(ding)的(de)(de)吸光(guang)(guang)度范圍、線性度、精(jing)密(mi)度和準(zhun)確(que)度等體現出(chu)來。光(guang)(guang)學(xue)系(xi)統(tong)好的(de)(de)話(hua),則上述指標也應(ying)較(jiao)佳。測(ce)(ce)(ce)定(ding)的(de)(de)精(jing)密(mi)度與測(ce)(ce)(ce)定(ding)通(tong)(tong)道(dao)(dao)之間的(de)(de)均一性有直接(jie)關系(xi)。單通(tong)(tong)道(dao)(dao)可(ke)避免(mian)因通(tong)(tong)道(dao)(dao)不同所致的(de)(de)差異(yi)。 四、檢測速度 酶標儀(yi)的(de)檢(jian)測速(su)(su)(su)度是指(zhi)其完成(cheng)比色測定所需(xu)要的(de)時(shi)間(jian)(jian)。檢(jian)測速(su)(su)(su)度快(kuai),有利(li)于提高(gao)檢(jian)測的(de)精密度,即避免(mian)由于測定過程(cheng)中,因測定時(shi)間(jian)(jian)不同所致(zhi)的(de)各(ge)微(wei)孔間(jian)(jian)吸光度間(jian)(jian)的(de)差異。目前市(shi)場上常(chang)(chang)(chang)見(jian)的(de)酶標儀(yi)檢(jian)測速(su)(su)(su)度都非常(chang)(chang)(chang)快(kuai),通常(chang)(chang)(chang)在(zai)數秒鐘內(nei),如(ru)Labsystems公(gong)司(si)Dragon Wellscan MK-2和(he)MK-3檢(jian)測96孔只需(xu)2s(連續(xu)模式)或5s(步(bu)進模式)。Multiskan Ascent為單(dan)通道檢(jian)測,亦只需(xu)9s(連續(xu)模式)或14s(步(bu)進模式)。又如(ru)BioRad公(gong)司(si)的(de)Benchmark的(de)檢(jian)測速(su)(su)(su)度單(dan)波(bo)長為7s,雙波(bo)長為15s。 五、震板功能 酶(mei)標(biao)(biao)儀(yi)的震板(ban)功(gong)能(neng)是指酶(mei)標(biao)(biao)儀(yi)在對(dui)ELISA板(ban)孔進(jin)行比(bi)色(se)測定(ding)前對(dui)其進(jin)行振(zhen)蕩(dang)混勻(yun),使(shi)板(ban)孔內顏色(se)均一。目(mu)前市場上常見的酶(mei)標(biao)(biao)儀(yi)均有(you)震板(ban)功(gong)能(neng),所不(bu)同的是震板(ban)方式,有(you)的可按上下、左(zuo)右(you)或旋轉等方式及(ji)振(zhen)蕩(dang)幅度等任意(yi)調節,如(ru)Labsystems的MK-2;有(you)的則較為(wei)固定(ding),如(ru)BioRad 550。使(shi)用有(you)震板(ban)功(gong)能(neng)的酶(mei)標(biao)(biao)儀(yi),在進(jin)行ELISA測定(ding)顯色(se)反(fan)應完成加(jia)入終止劑后,可不(bu)必振(zhen)蕩(dang)混勻(yun),直接放人(ren)酶(mei)標(biao)(biao)儀(yi)上測定(ding)即(ji)可。 六、溫育功能 溫(wen)(wen)育功能(neng)是指酶標(biao)(biao)(biao)儀(yi)本身能(neng)按要(yao)求自動精確地控(kong)制儀(yi)器內部的(de)(de)溫(wen)(wen)度,使得ELISA測定(ding)中微孔(kong)板條(tiao)的(de)(de)溫(wen)(wen)育過程可在儀(yi)器內部完(wan)成(cheng),而無需再外配溫(wen)(wen)箱。目(mu)前(qian),只有(you)(you)(you)少部分酶標(biao)(biao)(biao)儀(yi)具(ju)有(you)(you)(you)此種功能(neng),如Labsystems公司(si)的(de)(de)Multiskan Ascent,BioRad公司(si)的(de)(de)Benchmark和(he)Biotek公司(si)的(de)(de)ElxS08等。溫(wen)(wen)育功能(neng)只是酶標(biao)(biao)(biao)儀(yi)的(de)(de)一個附加功能(neng),是否(fou)具(ju)有(you)(you)(you)并不能(neng)說明酶標(biao)(biao)(biao)儀(yi)檔次的(de)(de)高低及儀(yi)器的(de)(de)優劣。作為實(shi)驗室是否(fou)選擇,則可根據自己實(shi)驗室的(de)(de)條(tiao)件及需要(yao)來決定(ding)。 成都壹科醫療為您提供賽默飛世爾,移液器、酶標儀、洗板機及其它實驗室設備在四川、成都的產品、耗材的市場營銷、推廣、產品銷售、招投標、設備安裝、耗材更換、維修等工作。成都壹科醫療是您了解和購買賽默飛世爾,移液器、酶標儀、洗板機及其它實驗室設備的好幫手。 |
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