一、測定標準

參考食品(pin)國(guo)家標準：GB 4789.2-2016《食品(pin)安全國(guo)家標準 食品(pin)微生物學檢驗 菌落總數測定》。

二、操作過程

1、前期準備：

根據國家標(biao)準，提前準備好要(yao)用的平板計數瓊脂、平皿(min)、試(shi)管、稀(xi)釋液（生理鹽水）、三角燒瓶等(deng)，相應(ying)的材(cai)料進行(xing)滅(mie)菌處理（干熱滅(mie)菌或高壓滅(mie)菌）。

2、接收樣品：

收到樣品后(hou)(hou)，確(que)認樣品包裝是否完好，登記樣品信(xin)息，并將其保存在2~8℃冰箱中，然后(hou)(hou)在取樣時取出。

3、樣品處理：

按(an)照作業指(zhi)導書操作，仔細閱讀實驗(yan)要求(qiu)。一般(ban)實驗(yan)室收到的是(shi)干粉(fen)樣(yang)品、固體(ti)樣(yang)品、或者(zhe)液體(ti)樣(yang)品等。假如收到干粉(fen)樣(yang)品，那么首先需要將其(qi)配(pei)置成水溶(rong)液（即(ji)水化）。根據(ju)實驗(yan)要求(qiu)及(ji)經(jing)驗(yan)，進行預(yu)判，預(yu)估稀釋液倍數，溶(rong)解即(ji)可。

4、實驗前準備：

4.1實(shi)驗(yan)操(cao)作最好在超(chao)凈臺或者生(sheng)物安全(quan)柜里操(cao)作，需要把超(chao)凈臺或者生(sheng)物安全(quan)柜提(ti)前清(qing)理(li)、消毒處理(li)，確保實(shi)驗(yan)環境(jing)無(wu)菌。

4.2提前把(ba)要用到(dao)的平皿(min)、試管(guan)、稀釋(shi)液(ye)等放到(dao)操作臺上紫外殺菌。

5、實驗操作：

5.1稀釋

將(jiang)樣品從(cong)冰箱中(zhong)(zhong)取(qu)出達到室溫后(hou)開始取(qu)樣，在超(chao)潔凈臺或(huo)者生物安全柜下先用(yong)少許稀(xi)釋液（選取(qu)的(de)生理鹽水）進行(xing)水化后(hou)吸入無菌(jun)(jun)瓶或(huo)袋(dai)中(zhong)(zhong)，再用(yong)剩余(yu)的(de)稀(xi)釋液進行(xing)洗滌并全部轉入無菌(jun)(jun)瓶或(huo)袋(dai)中(zhong)(zhong)。

洗滌轉(zhuan)移(yi)時注意樣品(pin)(pin)瓶蓋的清洗和無菌操作，將全部的水化(hua)液(ye)(ye)(ye)進行(xing)均質(zhi)混勻(yun)，一般作為(wei)原(yuan)液(ye)(ye)(ye)立刻(ke)進行(xing)接(jie)種；再取(qu)25ml到225ml稀釋液(ye)(ye)(ye)中均質(zhi)混勻(yun)，制成10-1梯度樣品(pin)(pin)勻(yun)液(ye)(ye)(ye)。

用(yong)1ml無(wu)菌吸管取1:10的(de)樣(yang)液(ye)到9ml生(sheng)理鹽水試管中，制成1:100的(de)樣(yang)液(ye)，以此類推。再將(jiang)幾個稀釋度的(de)樣(yang)液(ye)接種到提(ti)前做好(hao)標記的(de)無(wu)菌平(ping)皿中。

5.2傾注平板

將提前(qian)在(zai)水(shui)浴鍋里涼至46℃的(de)平(ping)(ping)(ping)(ping)(ping)板計數營(ying)養(yang)瓊(qiong)脂(zhi)培養(yang)基注入(ru)平(ping)(ping)(ping)(ping)(ping)皿(min)約15ml，并轉動平(ping)(ping)(ping)(ping)(ping)皿(min)，混合均勻。同時將營(ying)養(yang)瓊(qiong)脂(zhi)培養(yang)基傾入(ru)加(jia)有(you)1ml稀釋液（不含(han)樣品）的(de)滅菌平(ping)(ping)(ping)(ping)(ping)皿(min)內作空白對照。傾注過程一(yi)般左手(shou)拿(na)平(ping)(ping)(ping)(ping)(ping)皿(min)，右手(shou)拿(na)瓊(qiong)脂(zhi)瓶，左手(shou)將平(ping)(ping)(ping)(ping)(ping)皿(min)打開30°左右的(de)縫(feng)隙，傾注瓊(qiong)脂(zhi)大約到(dao)平(ping)(ping)(ping)(ping)(ping)皿(min)底的(de)二分之一(yi)處，左三圈、右三圈輕輕混勻，然后放到(dao)臺面上。待(dai)瓊(qiong)脂(zhi)凝固后，翻轉平(ping)(ping)(ping)(ping)(ping)板，置36±1℃溫箱內培養(yang)48±2h。

5.3觀察計數

24h觀察檢測結(jie)(jie)(jie)果(guo)有(you)(you)無異常現象(xiang)，是否有(you)(you)蔓延菌(jun)落出現。48h再按照GB 4789.2的(de)要求進行(xing)菌(jun)落計數。在對結(jie)(jie)(jie)果(guo)進行(xing)分析后，選取檢測結(jie)(jie)(jie)果(guo)的(de)平均(jun)值為(wei)最終數據。

三、注意事項

1、當無(wu)法預(yu)判樣品菌(jun)落總數含量時，需要梯度稀釋，此步驟尤其關鍵(jian)，必須盡(jin)可能地減少誤差(cha)。

2、傾(qing)注用培養基(ji)應在46℃水浴內保溫，溫度過高會(hui)影(ying)響細菌生長，過低(di)瓊(qiong)脂易(yi)凝固，不(bu)(bu)能與菌液充分混(hun)勻。如無(wu)水浴條件，應以皮(pi)膚感受(shou)較熱(re)而不(bu)(bu)燙為宜。

3、傾(qing)注(zhu)培(pei)養基的量規定(ding)不(bu)一，從12~20ml不(bu)等，一般以15ml較為適(shi)宜，平板過(guo)厚會影響(xiang)觀(guan)察(cha)，太薄(bo)又易于干(gan)裂。傾(qing)注(zhu)時，培(pei)基底(di)部如有沉淀物，應將底(di)部棄去，以免與菌落混淆(xiao)而影響(xiang)計數觀(guan)察(cha)。

4、傾注過程力度一定掌握好(hao)，絕不(bu)能把瓊脂濺出來(lai)。

5、為(wei)使菌(jun)落能在平板上(shang)均勻(yun)分布，檢液加(jia)入平皿(min)時要盡可能放(fang)在中央部位(wei)，然后應盡快傾注培養(yang)基并旋轉(zhuan)混勻(yun)，可正反兩個方向旋轉(zhuan)，檢樣從開始稀釋到傾注最后一個平皿(min)所用時間不(bu)易(yi)過(guo)長，以防止(zhi)細菌(jun)有所死亡或繁(fan)殖。

6、瓊脂培養基放水浴鍋前一定(ding)要混合均勻(yun)，以防(fang)出現平(ping)皿(min)不凝固現象；拿出傾注(zhu)時要用(yong)噴有75%酒精的抹布(bu)擦(ca)拭(shi)干凈。

7、冷卻(que)的過(guo)程不要著急，冷卻(que)充分后再倒置(zhi)放(fang)進培養(yang)箱培養(yang)，放(fang)置(zhi)的時候要盡量避免放(fang)到風機口處，每摞不要超過(guo)6個(ge)平皿(min)。

8、檢測結束(shu)后所有的稀(xi)釋液樣(yang)品可放到(dao)冰箱里(li)0-5℃冷藏，以備(bei)實驗出錯時再(zai)用。

成都壹科醫療為您提供江蘇康健，搖床及振蕩器、混勻器及離心機其它實驗室設備在四川、成都的產品、耗材的市場營銷、推廣、產品銷售、招投標、設備安裝、耗材更換、維修等工作。成都壹科醫療是您了解和購買江蘇康健，搖床及振蕩器、混勻器及離心機其它實驗室設備的好幫手。